OBJETIVO
Aprender a realizar y aplicar la
metodología para un recuento de Leucocitos por milímetro cúbico de sangre e
interpretar el resultado.
FUNDAMENTO
Para el conteo de leucocitos, se usan
métodos sistemáticos que son más rápidos y precisos, y los métodos manuales.
Todo método manual de recuento
celular incluye 3 fases:
·
Dilución de la sangre
·
Muestreo de la sangre diluida en un
volumen
·
Recuento de células en ese volumen
Para el recuento
de leucos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas, que corresponden a
los campos 1, 3,7 y 9.
Para su
dilución, se hace lo mismo que para los hematíes pero empleando la pipeta de
blancos, de modo que la solución que obtenemos es de 1/20. Se utiliza como
diluyente el líquido de Turk. El líquido de Turk es hipotónico de modo que se
destruyen los hematíes y así no entorpecen en el recuento.
El líquido de
Turk consta de ácido acético glaciar 2ml, violeta de genciana disolución de 1%
1ml y agua destilada en cantidad suficiente para 1000ml. Deberá filtrarse a
menudo para evitar levaduras y hongos.
En un principio
es un poco difícil distinguir los leucocitos de los restos de membranas de los
hematíes hemolizados. Se debe tener en cuenta que los leucocitos son más
refringentes (más brillantes) al moverlo con el microscopio que los restos de
hematíes. Se debe observar la presencia de la membrana citoplasmática y de la
membrana nuclear (a veces más) como líneas finas y brillantes. Esto se observa
fácilmente moviendo el microscopio hacia delante y hacia atrás
MATERIAL
·
Pipeta de Thoma para glóbulos blancos
(perla blanca)
·
Equipo para venopuncion (Tubo lila)
·
Boquilla blanca
·
Tubo de goma
·
Tubos de ensayo
·
Papel parafilm
·
Cámara de Neubauer
·
Cubrehematimetro
·
Microscopio
·
Gasas
SUSTANCIAS
·
Alcohol al 70%
·
Sangre venosa
·
Liquido de Turk
PROCEDIMIENTO
1. Una vez
seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción
venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA
2. Colocar el tubo
de plástico y la boquilla para aspirar en la pipeta
3. Llenar la pipeta de glóbulos blancos con sangre hasta la
marca 0.5 para realizar una dilución de 1/20. Limpiar la punta con gasa o papel
absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el
excedente
4. Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el
diluyente (liquido de Turk) y absorber hasta la marca 11, no deben quedar
burbujas.
5. Se tapan ambos extremos de la pipeta con papel parafilm y se
coloca en un rotador automático o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos.
6. Montar la
laminilla de vidrio en la cámara para recuento. Debe estar limpia y seca.
7.Destapar la
pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequeña cerca
de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene exactamente.
8. Dejar 3 minutos que los leucocitos se sedimenten.
9 9.Colocar en la
platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. y contar en los 4
cuadrados angulares.
10. En el recuento
se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas
limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeño de recuento y no se
consideran los que estén en los límites inferior y derecho.
RESULTADOS
Los recuentos de leucocitos, al igual
que los eritrocitos, se expresan como concentraciones, que en este caso
serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3
Después de contar los glóbulos
blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman el total de ellos y con dicha
cantidad de hace el siguiente cálculo:
N° de leucocitos x mm3 =
altura x dilución x área
N° de leucocitos x mm3 =
1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000
N° de leucocitos x mm3 =
4/200 = 1/50
N° de leucocitos x mm3 =
N° de leucocitos contados x 50
VALORES DE
REFERENCIA
(Millones de células/mm3)
Hombres y
Mujeres:………………………………..5 000-10 000
CONCLUSIÓN
No pudimos hacer el conteo, ya que por cuestiones prácticas nuestros leucocitos se secaron, y dijo EL DR. VICENTE, QUE NO HABÍA PROBLEMA YA QUE VOLVEREMOS A REALIZAR LA PRÁCTICA.
