Propósito:
Que
el alumno aplique la metodología para la cuantificación de Reticulocitos en una
muestra de sangre.
Fundamento:
El
Reticulocito es un eritrocito inmaduro que contiene restos de ARN (ácido
ribonucleico) ribosomal. Los colorantes supravitales son capaces de precipitar
el ARN ribosomal permitiendo la diferenciación entre los Reticulocitos y los
eritrocitos maduros.
La
cuenta de Reticulocitos es útil para evaluar el recambio eritrocitario, por
ejemplo en una anemia hemolítica, donde los eritrocitos por diversas causas se
destruyen antes de 120 días, que es su vida media, en el caso de ésta anemia,
se destruyen en un corto tiempo y la médula ósea con el propósito de compensar
la pérdida de estos eritrocitos, manda a sangre periférica una mayor cantidad
de Reticulocitos que al cuantificarlos y obtener cifras elevadas de estas
células se puede establecer un diagnóstico.
Estas
tinciones son conocidas como supravitales, como la nueva azul de metileno N o
de azul de cresilo brillante, estos colorantes se unen, neutralizan y
establecen enlaces cruzados con el ARN.
Estas
tinciones hacen que el ARN ribosómico y residual se precipiten juntos con las
pocas masas restantes de mitocondrias y ferritina (depósito de hierro), en los
Reticulocitos, para formar cúmulos y filamentos visibles al microscopio de
color azul oscuro (retículo).
Material y Equipo
v Tubos de
ensaye.
v Portaobjetos.
v Microscopio.
v Equipo de
Vacutainer.
Colorantes:
v Nuevo azul de
metileno.
v Azul de
cresilo brillante
Técnica:
1.-
De una muestra de sangre con anticoagulante, se colocan de dos a tres gotas en
un tubo de ensaye.
2.-
Adicionar una cantidad igual de colorante nuevo azul de metileno para
Reticulocitos.
3.-
Mezclar y dejar reposar durante 10 minutos a temperatura ambiente.
4.-
Realizar un extendido en un portaobjetos limpio, con una gota de la mezcla.
5.-
Dejar secar al aire.
6.-
Examinar la preparación con el objetivo de seco fuerte e inmersión.
7.-
Contar el número de Reticulocitos existentes por cada 1000 eritrocitos.
Cálculos:
%
RETICULOCITOS = Reticulocitos en 1000 eritrocitos
10
Nota:
Los Reticulocitos tardan un día en promedio en la circulación, antes de
transformarse en eritrocitos maduros. Cuando la anemia es grave, la médula ósea
libera los Reticulocitos de manera temprana hacia la circulación, incrementando
el tiempo de maduración hasta 3 días, aumentando así, la cuenta de
Reticulocitos por acumulación; en estos casos debe realizarse una corrección a
la cuenta de Reticulocitos obtenidas.
Valores
de referencia:
ADULTOS: 0.5-2.0 %
RECIEN NACIDOS: 2.5-6.5%
IMAGENES DE LA PRÁCTICA:
