► PRUEBA DE
VIH ◄
USO
La prueba de VIH
es un ensayo individual para la detección de anticuerpos para el virus
de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y 2 en suero, plasma o sangre total.
RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA
El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) se
ha reconocido como el agente etiológico del Síndrome de Inmunodeficiencia
Adquirida (SIDA). El VIH se ha aislado de:
a) Numerosos pacientes con SIDA y desordenes
relacionados.
b) Miembros asintomáticos de grupos de alto riesgo
de SIDA.
c) Pacientes sin otros factores de alto riesgo
quienes han contraído SIDA después de recibir transfusiones sanguíneas.
La mayoría de los pacientes con
SIDA o Complejos Relacionados con SIDA (ARC) tienen anticuerpos para las
proteínas estructurales del virus de VIH. Es más una proporción de miembros de
grupos de alto riesgo clínicamente saludables como los homosexuales,
hemofílicos o adictos a las drogas son también seropositivos. La infección por
VIH se diagnostica mediante la detección de anticuerpos específicos para el
virus. Actualmente se conocen dos tipos de VIH, VIH-1 y VIH-2 con 40-60% de aminoácidos
homólogos entre las dos cepas.
La prueba de VIH es un inmunoensayo rápido basado en el
principio del sandwich inmunocromatográfico.
PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO
Las proteínas recombinantes representando las
regiones de las proteínas de la cubierta del VIH-1 Y VIH-2, la glicoproteína
gp41, gp120 (VIH-1), y la glicoproteína gp36 (VIH-2) respectivamente so
inmovilizadas en la región de la prueba de la tira de nitrocelulosa. Estas
proteínas también se unen al aro coloidal
y se impregnan por debajo de la región de prueba del cartucho. Una banda delgada de la membrana de nitrocelulosa también se
sensibiliza como una región control.
Durante la prueba se aplican dos gotas de suero,
plasma o sangra total al área de muestra, seguido de dos gotas de buffer de
lavado y se deja que reaccionen. Loas anticuerpos IgG, específicos para las
proteínas recombinantes del VIH-1 y VIH-2, reaccionaran con los antígenos
unidos a las partículas de oro coloidal. El complejo partículas de oro
coloidal-anticuerpos se mueve cromatográficamente a través de la membrana a las
regiones de prueba y control de cartucho de prueba.
Una reacción positiva se visualiza por una banda
de color rosa/púrpura en la región de prueba del cartucho.
Una reacción negativa ocurre en la ausencia de
anticuerpos inmunoglobulina humanos para VIH en la muestra analizada.
Consecuentemente se desarrolla una banda no detectable visualmente en la región
de prueba del cartucho.
Un exceso de conjugado forma una segunda banda
rosa/roja en la región control del cartucho. La aparición de esta banda indica
el adecuado funcionamiento de los reactivos del equipo.
MATERIAL Y REACTIVOS
1. Cartuchos de Prueba
Cada cartucho de
prueba contiene oro coloidal marcado con proteínas VIH recombinantes, proteínas
VIH recombinantes como zona de prueba y una línea de control.
2. Reactivo de Lavado
Reactivo
individual para sangre total, suero o plasma.
3. Pipetas desechables
4. Inserto
5. Cronómetro
6. Equipo de Toma de muestra de sangre (ejem.: lancetas, tunos capilares/tubos de
prueba).
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
- El equipo de prueba de VIH y la solución de
lavado se puede almacenar de 275-300K (2-27°C).
- Los componentes del equipo no se deben de
utilizar después de su fecha de caducidad.
- No fume, beba
o coma en áreas en las cueles se estén manipulando las muestras.
- Deseche todas las muestras, pipetas y cartuchos
utilizados ya que son capaces de transmitir infección. Los métodos de desecho
de preferencia son esterilizando en autoclave a 121°C por un mínimo de 60min. O
por incineración.
- Cuando se elimine el buffer de lavado evite su
contacto con algún ácido.
- Todos los derrames se deben de limpiar
completamente utilizando un desinfectante adecuado como el hipoclorito de
sodio.
- Utilice una pipeta desechable y un cartucho por
cada muestra probada.
- Los controles proporcionados se han certificado
libres de virus. Como con todos los ensayos de screening cualquier resultado se
debe de considerar presuntivo hasta que se haya realizado un ensayo
confirmatorio de acuerdo a las prácticas locales o guías de la OMS.
RECOLECCION Y ALMACENAMIENTO DE LA MUSTRA
Se puede utilizar sangre total, suero o plasma.
·
Sangre Total:
Si se usa una lanceta para punción capilar, las gotas de sangre se deben de
tomar de la punta del dedo utilizada la pipeta proporcionada en el equipo y a
partir de esta pipeta colocar las gotas en el cartucho. Las gotas de sangre no
se deben colocar directamente de la punta del dedo al cartucho ya que su
volumen puede variar.
NOTA IMPORTANTE: Las muestras de sangre total (MUESTRAS FRESCAS)
se deben usar dentro de los diez minutos después de su toma para un
funcionamiento óptimo del cartucho.
-
Si la
muestra se ha comenzado a coagular no vuelva a mezclar antes de realizar la
prueba. En tales casos, se debe de pipetear el suero claro del coágulo y
utilizarlo para el análisis.
-
Si se ha
utilizado una muestra de sangre con anticoagulante, la sangre total se puede
colocar directamente en los cartuchos usando la pipeta proporcionada. Si la
prueba no se va a llevar a cabo inmediatamente, las muestras se deben de
almacenar de 275-281k (2-8°C) máximo tres días o preferentemente las muestras
se deben de centrifugar y conservar el plasma para pruebas futuras.
·
Suero o Plasma: El suero o plasma se puede mantener de 275-281k
(2-8°C) por tres días. Las muestras se deben de congelar para el caso de
almacenamientos más prolongados (no más de cinco días). Evite repetir el congelamiento-descongelamiento
de las muestras.
NOTA IMPORTANTE: De preferencia utilice muestras frescas para
realizar la prueba.
CONTROL DE CALIDAD
Las Buenas Prácticas de Laboratorio requieren el
uso de muestras control para asegurar un funcionamiento adecuado del cartucho
por lo menos una vez al día.
El procedimiento de control de calidad en el
cartucho de prueba indica que la prueba esta funcionando correctamente. Una
line rosa/roja siempre debe de aparecer en la ventana control.
PROCEDIMIENTO
1)
Si cualquier
muestra/reactivo se ha almacenado en refrigeración, permita que se atemperen
20min. A temperatura ambiente.
2)
Marque la
prueba con la información apropiada del paciente.
3)
Utilizando
una de las pipetas proporcionadas tome la muestra (suero/plasma/sangre total).
4)
Colocando la
pipeta sobre el área de muestra adicione dos gotas de muestra (aproximadamente
60 ЧL) cuidadosamente.
5)
Adicione dos
gotas (aproximada- mente 60 ЧL) del reactivo de lavado al área de la muestra.
6)
Permita que
transcurran exactamente 10min. Para que la reacción ocurra. El resultado se
debe de leer exactamente al final de los 10min. Del tiempo de incubación. Los
resultados son estables aproximadamente durante 5-10min.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS DE PRUEBA
·
Positivo:
Una línea de cualquier intensidad en el área de prueba, una segunda línea en el
área de control indica un resultado positivo.
·
Negativo:
Una línea en el área de control únicamente indica un resultado negativo.
·
Invalido:
Ausencia de una línea en el área de control. La prueba se debe de repetir con
un cartucho nuevo independientemente de que aparezca un alinea en el área de
prueba.
RESULTADOS
ü
Puesto a que
se observa una línea de color rasa/roja; tanto en la región de prueba como en
la región de control en el cartucho, mi resultado es…
POSITIVO
LIMITACIONES
-
El
procedimiento de prueba de VIH y la interpretación de los resultados se deben
de seguir al pie de la letra para la detección de anticuerpos VIH en suero,
plasma o sangre total.
-
La prueba de VIH esta hecha para probar
únicamente muestras sin diluir. Las muestras no se deben de diluir antes de
realizar la prueba.
-
Los
individuos inmunosuprimidos o inmunocomprometidos infectados con VIH-1 o VIH-2
pueden no producir anticuerpos para el virus. Probar con cualquier equipo
diseñado para detectar anticuerpos puede dar resultados negativos y podrían no
ser un método de prueba adecuado para teles pacientes.
-
Los niños
pueden recibir anticuerpos de la madre infectada o puede ser que no produzcan
anticuerpos en respuesta a una infección. Por lo tanto es necesario tener un
cuidado extremo en la interpretación de sus resultados.
-
El SIDA y el
ARC son síndromes clínicos y sus diagnósticos pueden establecerse clínicamente.
Los resultados de la prueba de VIH por si solos no se pueden
utilizar para diagnosticar SIDA. Un resultado negativo no excluye de la
posibilidad de exposición al VIH o infección con VIH.
● CONCLUSIÓN●
Cuando el VIH es introducido al cuerpo, el sistema
inmunitario comienza a producir anticuerpos. En este caso, los anticuerpos no
pueden combatir la infección, pero su presencia es utilizada para la detección
del mismo en el cuerpo.
En
esta práctica usando el principio inmunocromatográfico, en el que antígeno recombinante
del VIH conjugado con oro coloidal incrustado en la almohadilla del cartucho
reacciona con el anticuerpo del VIH presente en el suero, plasma o sangre
total, formando así, el complejo de
conjugado/anticuerpo del VIH; conforme la mezcla avanza a lo largo de la tira
reactiva, el complejo del conjugado/anticuerpo del VIH es capturado por el
antígeno recombinante del VIH que está inmovilizado en una membrana y forma una
línea de color rojo/rosa en la región de control indicando que dicha prueba es
funcional; cuando el resultado es positivo se observa una segunda línea de
color en la región de prueba.
Dicho
de otra manera, esta prueba rápida para
la detección del VIH buscan los anticuerpos que combaten el VIH en lugar de
buscar el VIH por sí solo.
La
realización de esta prueba es de vital
importancia, pues puede darnos un diagnóstico oportuno para la
aplicación temprana de un tratamiento contra dicho padecimiento y al mismo
tiempo prevenir el contagio de este virus que en el peor de los casos trae como
consecuencia la muerte.
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