VIH

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USO

La prueba de VIH  es un ensayo individual para la detección de anticuerpos para el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y 2 en suero, plasma o sangre total.

RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA

El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) se ha reconocido como el agente etiológico del Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). El VIH se ha aislado de:

a)     Numerosos pacientes con SIDA y desordenes relacionados.

b)     Miembros asintomáticos de grupos de alto riesgo de SIDA.

c)      Pacientes sin otros factores de alto riesgo quienes han contraído SIDA después de recibir transfusiones sanguíneas.

La mayoría de los pacientes con SIDA o Complejos Relacionados con SIDA (ARC) tienen anticuerpos para las proteínas estructurales del virus de VIH. Es más una proporción de miembros de grupos de alto riesgo clínicamente saludables como los homosexuales, hemofílicos o adictos a las drogas son también seropositivos. La infección por VIH se diagnostica mediante la detección de anticuerpos específicos para el virus. Actualmente se conocen dos tipos de VIH, VIH-1 y VIH-2 con 40-60% de aminoácidos homólogos entre las dos cepas.

La prueba de  VIH es un inmunoensayo rápido basado en el principio del sandwich inmunocromatográfico.

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO

Las proteínas recombinantes representando las regiones de las proteínas de la cubierta del VIH-1 Y VIH-2, la glicoproteína gp41, gp120 (VIH-1), y la glicoproteína gp36 (VIH-2) respectivamente so inmovilizadas en la región de la prueba de la tira de nitrocelulosa. Estas proteínas también se unen al aro coloidal  y se impregnan por debajo de la región de prueba del  cartucho. Una banda delgada de la  membrana de nitrocelulosa también se sensibiliza como una región control.

Durante la prueba se aplican dos gotas de suero, plasma o sangra total al área de muestra, seguido de dos gotas de buffer de lavado y se deja que reaccionen. Loas anticuerpos IgG, específicos para las proteínas recombinantes del VIH-1 y VIH-2, reaccionaran con los antígenos unidos a las partículas de oro coloidal. El complejo partículas de oro coloidal-anticuerpos se mueve cromatográficamente a través de la membrana a las regiones de prueba y control de cartucho de prueba.

Una reacción positiva se visualiza por una banda de color rosa/púrpura en la región de prueba del cartucho.

Una reacción negativa ocurre en la ausencia de anticuerpos inmunoglobulina humanos para VIH en la muestra analizada. Consecuentemente se desarrolla una banda no detectable visualmente en la región de prueba del cartucho.

Un exceso de conjugado forma una segunda banda rosa/roja en la región control del cartucho. La aparición de esta banda indica el adecuado funcionamiento de los reactivos del equipo.

MATERIAL Y REACTIVOS

1.       Cartuchos de Prueba

Cada cartucho de prueba contiene oro coloidal marcado con proteínas VIH recombinantes, proteínas VIH recombinantes como zona de prueba y una línea de control.

2.       Reactivo de Lavado

Reactivo individual para sangre total, suero o plasma.

3.       Pipetas desechables

4.       Inserto

5.       Cronómetro

6.       Equipo de Toma de muestra de sangre (ejem.: lancetas, tunos capilares/tubos de prueba).

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD

-       El equipo de prueba de VIH y la solución de lavado se puede almacenar de 275-300K (2-27°C).

-       Los componentes del equipo no se deben de utilizar después de su fecha de caducidad.

-       No fume, beba  o coma en áreas en las cueles se estén manipulando las muestras.

-       Deseche todas las muestras, pipetas y cartuchos utilizados ya que son capaces de transmitir infección. Los métodos de desecho de preferencia son esterilizando en autoclave a 121°C por un mínimo de 60min. O por incineración.

-       Cuando se elimine el buffer de lavado evite su contacto con algún ácido.

-       Todos los derrames se deben de limpiar completamente utilizando un desinfectante adecuado como el hipoclorito de sodio.

-       Utilice una pipeta desechable y un cartucho por cada muestra probada.

-       Los controles proporcionados se han certificado libres de virus. Como con todos los ensayos de screening cualquier resultado se debe de considerar presuntivo hasta que se haya realizado un ensayo confirmatorio de acuerdo a las prácticas locales o guías de la OMS.

RECOLECCION Y ALMACENAMIENTO DE LA MUSTRA

Se puede utilizar sangre total, suero o plasma.

·         Sangre Total: Si se usa una lanceta para punción capilar, las gotas de sangre se deben de tomar de la punta del dedo utilizada la pipeta proporcionada en el equipo y a partir de esta pipeta colocar las gotas en el cartucho. Las gotas de sangre no se deben colocar directamente de la punta del dedo al cartucho ya que su volumen puede variar.

NOTA IMPORTANTE: Las muestras de sangre total (MUESTRAS FRESCAS) se deben usar dentro de los diez minutos después de su toma para un funcionamiento óptimo del cartucho.

-          Si la muestra se ha comenzado a coagular no vuelva a mezclar antes de realizar la prueba. En tales casos, se debe de pipetear el suero claro del coágulo y utilizarlo para el análisis.

-          Si se ha utilizado una muestra de sangre con anticoagulante, la sangre total se puede colocar directamente en los cartuchos usando la pipeta proporcionada. Si la prueba no se va a llevar a cabo inmediatamente, las muestras se deben de almacenar de 275-281k (2-8°C) máximo tres días o preferentemente las muestras se deben de centrifugar y conservar el plasma para pruebas futuras.

·         Suero o Plasma: El suero o plasma se puede mantener de 275-281k (2-8°C) por tres días. Las muestras se deben de congelar para el caso de almacenamientos más prolongados (no más de cinco días). Evite repetir el congelamiento-descongelamiento de las muestras.

NOTA IMPORTANTE: De preferencia utilice muestras frescas para realizar la prueba.

CONTROL DE CALIDAD

Las Buenas Prácticas de Laboratorio requieren el uso de muestras control para asegurar un funcionamiento adecuado del cartucho por lo menos una vez al día.

El procedimiento de control de calidad en el cartucho de prueba indica que la prueba esta funcionando correctamente. Una line rosa/roja siempre debe de aparecer en la ventana control.

PROCEDIMIENTO

1)      Si cualquier muestra/reactivo se ha almacenado en refrigeración, permita que se atemperen 20min. A temperatura ambiente.

2)      Marque la prueba con la información apropiada del paciente.

3)      Utilizando una de las pipetas proporcionadas tome la muestra (suero/plasma/sangre total).

4)      Colocando la pipeta sobre el área de muestra adicione dos gotas de muestra (aproximadamente 60 ЧL) cuidadosamente.

5)      Adicione dos gotas (aproximada- mente 60 ЧL) del reactivo de lavado al área de la muestra.

6)      Permita que transcurran exactamente 10min. Para que la reacción ocurra. El resultado se debe de leer exactamente al final de los 10min. Del tiempo de incubación. Los resultados son estables aproximadamente durante 5-10min.

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS DE PRUEBA

·         Positivo: Una línea de cualquier intensidad en el área de prueba, una segunda línea en el área de control indica un resultado positivo.

·         Negativo: Una línea en el área de control únicamente indica un resultado negativo.

·         Invalido: Ausencia de una línea en el área de control. La prueba se debe de repetir con un cartucho nuevo independientemente de que aparezca un alinea en el área de prueba.

RESULTADOS

ü  Puesto a que se observa una línea de color rasa/roja; tanto en la región de prueba como en la región de control en el cartucho, mi resultado es…

POSITIVO

LIMITACIONES

-          El procedimiento de prueba de VIH y la interpretación de los resultados se deben de seguir al pie de la letra para la detección de anticuerpos VIH en suero, plasma o sangre total.

-          La  prueba de VIH esta hecha para probar únicamente muestras sin diluir. Las muestras no se deben de diluir antes de realizar la prueba.

-          Los individuos inmunosuprimidos o inmunocomprometidos infectados con VIH-1 o VIH-2 pueden no producir anticuerpos para el virus. Probar con cualquier equipo diseñado para detectar anticuerpos puede dar resultados negativos y podrían no ser un método de prueba adecuado para teles pacientes.

-          Los niños pueden recibir anticuerpos de la madre infectada o puede ser que no produzcan anticuerpos en respuesta a una infección. Por lo tanto es necesario tener un cuidado extremo en la interpretación de sus resultados.

-          El SIDA y el ARC son síndromes clínicos y sus diagnósticos pueden establecerse clínicamente. Los resultados de  la  prueba de VIH por si solos no se pueden utilizar para diagnosticar SIDA. Un resultado negativo no excluye de la posibilidad de exposición al VIH o infección con VIH.

● CONCLUSIÓN●

Cuando  el VIH es introducido al cuerpo, el sistema inmunitario comienza a producir anticuerpos. En este caso, los anticuerpos no pueden combatir la infección, pero su presencia es utilizada para la detección del mismo en el cuerpo.

En esta práctica usando el principio inmunocromatográfico, en el que antígeno recombinante del VIH conjugado con oro coloidal incrustado en la almohadilla del cartucho reacciona con el anticuerpo del VIH presente en el suero, plasma o sangre total, formando así,  el complejo de conjugado/anticuerpo del VIH; conforme la mezcla avanza a lo largo de la tira reactiva, el complejo del conjugado/anticuerpo del VIH es capturado por el antígeno recombinante del VIH que está inmovilizado en una membrana y forma una línea de color rojo/rosa en la región de control indicando que dicha prueba es funcional; cuando el resultado es positivo se observa una segunda línea de color en la región de prueba.

Dicho de otra manera, esta  prueba rápida para la detección del VIH buscan los anticuerpos que combaten el VIH en lugar de buscar el VIH por sí solo.

La realización de esta prueba es de vital  importancia, pues puede darnos un diagnóstico oportuno para la aplicación temprana de un tratamiento contra dicho padecimiento y al mismo tiempo prevenir el contagio de este virus que en el peor de los casos trae como consecuencia la muerte.

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